產品簡介：

本產品是專門用于提取酵母質粒 DNA 的產品(不適用于酵母 dsRNA 質粒)。是根據酵母細胞壁十分堅硬的特點，在細菌質粒堿裂解法的基礎上，增加了高效裂解酵母細胞壁的預處理步驟，可在 1 小時左右得到可以用于 PCR 或轉化酵母質粒 DNA。

產品特點：

1.即開即用，經濟實惠，客戶自己不需要準備額外的試劑。

2.實驗快速，整個過程只需要一個小時左右，可同時處理多個樣品。

3.得到的酵母質粒 DNA 純度高，可直接用于轉化和 PCR 等實驗。

4.可以從平板上的菌斑或液體培養的酵母中抽提質粒 DNA。

5.安全，不需使用玻璃珠、酚、氯仿等試劑。

6.每 5-10mL 酵母培養液一般可以提取到 1μg 左右的高拷貝酵母質粒 DNA。

7.酵母質粒DNA 純化溶液 C 中有藍色染料，便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況，保證實驗效果。

8.本產品足夠 50 次的酵母質粒 DNA 微量提取。

9.酵母質粒DNA 純化試劑盒（過柱法）只用于科研。

產品參數：

產品規格

保存和運輸

常溫運輸和保存，其中破壁酶和 RNase A 溶液需要低溫運輸，-20℃保存有效期一年。

自備試劑

無菌水

使用方法：

1.將 5-10mL 酵母過夜液體培養物分多次轉移到 1.5mL 塑料離心管中。每轉移一次后，需要 14000×g 室溫離心 1 分鐘，然后吸棄液體培養基。注意： 不要使用培養時間超過 16 小時的酵母液體培養物，否則質粒 DNA 產量偏低；也不要使用超過 10mL 的酵母液體培養物，否則破壁不充分，降低質粒DNA 產量。

2.加入 1mL 自備的無菌水，充分震蕩混勻，14000×g 室溫離心 1 分鐘，吸棄上清。

3.加入 600μL 酵母質粒 DNA 純化溶液A，充分震蕩細胞沉淀重懸，95℃保溫 10 分鐘。

4.14000×g 室溫離心 1 分鐘，棄上清液。

5.加入 250μL 含破壁酶的酵母質粒 DNA 純化溶液 B(配制方法是將本試劑盒提供的 50mg 粉末狀的破壁酶和 0.15mL RNase A 溶液全部加入到裝有 13mL 酵母質粒DNA 純化溶液 B 的塑料瓶中，輕柔搖晃混勻后使用。未用完的部分需要分裝成小份然后放-20℃保存，否則破壁酶很容易失去活性)，  吹打混勻。

6.37℃保溫 30 分鐘，延長保溫時間到 60 分鐘有利于細胞壁的裂解。注意： 放置較長時間后，酵母質粒DNA 純化溶液 B 中的裂壁酶會逐漸失活，額外再加入一些裂壁酶（如蝸牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme 等，總濃度為 1mg/mL）可以極大提高產量。

7.將離心管放冰浴冷卻后，加入 250μL 酵母質粒 DNA 純化溶液 C，輕輕顛倒混勻溶液藍色將變得均勻并且溶液將變得粘稠，然后室溫放置 5-10 分鐘。注意：不要劇烈震蕩，否則基因組 DNA 將斷裂并污染質粒 DNA。

8.加入 350μL 酵母質粒 DNA 純化溶液 D，輕輕顛倒混勻幾次，溶液由藍色變成無色，將有白色絮狀沉淀產生，然后冰浴放置 10-30 分鐘（如果質粒較長， 最好放置 30 分鐘）。

9.14000×g 室溫離心 6-10 分鐘，將上清液轉移到離心吸附柱中。注意：不要將漂浮在液面的沉淀物（如果有的話）轉移到離心吸附柱中。上清液可以  分多次轉移。

10.室溫下放置至少 2 分鐘以讓質粒 DNA 充分結合到離心吸附柱上。

11.14000×g 室溫離心 1 分鐘，棄穿透液。

12.將 500μL 通用洗柱液加入離心吸附柱中，14000×g 室溫離心 1 分鐘，棄穿透液。

13.重復上步操作一次。

14.14000×g 室溫離心 1 分鐘去除離心吸附柱中殘留液體。不要此步省略，否則殘留洗液將影響后續的電泳、PCR 和轉化實驗。

15.將離心吸附柱套在一干凈的 1.5mL 塑料離心管中，加入 30-100μL DNA 洗脫液（基因組純化專用）（加入的量取決于預期的 DNA 濃度）至離心吸附柱的膜的中央。

16.室溫下放置至少 2 分鐘。

17.14000×g 室溫離心 1 分鐘以洗脫 DNA。

18.如有必要，可以再加入適量 DNA 洗脫液（基因組純化專用）洗出殘留的 DNA。第二次洗脫得到的 DNA 的產量約為第一次的 30-50%。不要將已經洗脫的、含 DNA 的溶液再加上去。

選擇我們的酵母質粒DNA 純化試劑盒（過柱法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！