兔脑炎微孢子虫抗体IgM ELISA试剂盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存：2-8℃。
2.有效期：6个月
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中兔脑炎微孢子虫抗体 IgM(E. cuniculi IgM)表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中脑炎微孢子虫抗体 IgM(E. cuniculi IgM) 相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体
-酶标抗原复合物，经过彻-底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中兔脑炎微孢子虫抗体 IgM(E. cuniculi IgM)的存在与否。
试剂盒组成
130 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7终止液6ml×1 瓶
2酶标试剂6ml×1 瓶8阳性对照0.5ml×1 瓶
3酶标包被板12 孔×8 条9阴性对照0.5ml×1 瓶
4样品稀释液6ml×1 瓶10说明书1 份
5显色剂A 液6ml×1 瓶11封板膜2 张
6显色剂 B 液6ml×1/瓶12密封袋1 个
操作步骤
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20 临界值(CUT OFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为兔脑炎微孢子虫抗体 IgM(E. cuniculi IgM)阴性
阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为兔脑炎微孢子虫抗体 IgM(E. cuniculi IgM)阳性。
注意事项
1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2.兔脑炎微孢子虫抗体IgM ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。
021-62457717
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