產品簡介：

本試劑盒用于體外細菌內毒素的檢測，禁止以任何途徑進入機體。本試劑盒  又稱鱟試劑，為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品。鱟試劑中  含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH 值及無干擾物質），細菌內毒素激活 C 因子，引起一系列酶促反應，使鱟試劑產生凝集反應形成凝膠。

產品特點：

1.可以用于定性檢測內毒素。

2.靈敏度可以達到 0.06 EU/mL。

3.本產品足夠 10 次內毒素半定量測定。

4.凝膠法內毒素半定量試劑盒只可用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

鱟試劑10 次安培瓶

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

常溫運輸，陰涼處避光 2-20℃保存，有效期兩年。

自備試劑

細菌內毒素標準品、無內毒素水。無內毒素吸頭，無內毒素玻璃試管（稀釋和反

應用）。耐熱器皿可以 250℃干烤 30 分鐘去內毒素。

使用方法：

一、待測樣品溶液的制備

1.待測樣品的 pH 值應在 6.0–8.0 之間，若超出此范圍，需用無熱原緩沖液或 0.1N *、0.1N 鹽酸調節。若樣品中可能存在鱟實驗的干擾物質，見本說明書第 13 點“樣品的干擾實驗"。若樣品中可能含有導致鱟試劑中G 因子旁路反應的（1,3）β－D－葡聚糖，需選用不會對（1,3）β－D－葡聚糖起反應的特異性鱟試劑。

二、細菌內毒素標準溶液及對照液的準備(本試劑盒不提供內毒素標準品）

2.取細菌內毒素工作標準品 1 支，按其使用說明書配制 2?、1?、0.5?及 0.25? 的一系列內毒素標準溶液（?為鱟試劑靈敏度標示值），備用。

3.準備陰性對照液，即無內毒素水。

4.準備陽性對照液，即濃度為 2?的內毒素標準溶液。

5.準備樣品陽性對照液，即添加濃度為 2?內毒素標準的樣品溶液。三、內毒素檢測

6.鱟試劑（本產品）的溶解：按標示量（本試劑盒為 0.1 mL/支）加 0.1 mL

無內毒素水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑完-全溶解。注意不要引起氣泡，

溶解后的試劑應在 10 分鐘內使用（即配即用）。

7.樣品最大有效稀釋倍數（MVD）的計算： MVD＝ C×L/?

?：測試用鱟試劑靈敏度標示值(EU/mL)；L：待測樣品細菌內毒素限值；C：待測樣品濃度或樣品復溶后所得樣品濃度。當 L 單位為 EU/mL 時，C 的單位為 1 mL/mL；當 L 單位為 EU/mg 或者 EU/U 時，C 的單位為 mg/mL 或者 U/mL。

8.按照計算所得體積，加無內毒素水到待測樣品中得到制備樣品工作液。

9.在標記的反應管中分別加入 0.1 mL 陰性對照液、0.1 mL 陽性對照液、0.1 mL 待測樣品陽性對照液、0.1 mL 待測樣品工作液，封閉管口，輕輕搖勻， 垂直放入 37℃的恒溫器中溫育 60 分鐘±2 分鐘，溫育期間避免振動。

10.將試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉 180 度。若管內的內容物呈堅實凝膠， 不變形，不從管壁滑脫為陽性，記錄為（+）；若不呈凝膠或雖生成凝膠但不能保持完整并從管壁滑脫為陰性，記錄為（-）。

11.只有當陰性對照管結果均為陰性，陽性對照管、樣品陽性對照管結果均為陽  性，實驗方有效，否則無效，不需要分析待測樣品數據。若陰性對照管為陽  性，提示鱟試劑、無內毒素水或實驗器具可能受到污染。若陽性對照管為陰  性，提示鱟試劑活性減失、內毒素標準溶液效價降低，鱟試劑的靈敏度或內  毒素的效價標示不準確，或內毒素標準溶液的稀釋不正確。若樣品陽性對照  管為陰性，提示反應體系內有干擾因素存在。

四、其他常用實驗方案

12.鱟試劑靈敏度復核實驗

當使用新批號的鱟試劑或實驗條件發生了任何可能影響檢驗結果的改變時，  應按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內毒素檢查法》的“鱟試劑靈敏度復核實驗"進行實驗。按照下式復核靈敏度：?＝lg-1 (∑X/4)，當

0. 5 ?≤?≤2.0 ?時，鱟試劑靈敏度復核合格，檢測時仍以標示靈敏度 ?為準。

13.樣品的干擾實驗

當鱟試劑、樣品的來源、配方、生產工藝或實驗環境中發生了任何有可能影  響實驗結果的變化時，須按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內毒素檢查法》的“干擾實驗"進行干擾實驗。具體方法是以待測樣品代替無內  毒素水為溶劑，配制 2 ?、1 ? 、0.5 ?及 0.25 ?的內毒素系列標準溶液進行靈敏度復核。若靈敏度復核值在 0.5?到 2?之間(包含 0.5 ?及 2 ?)，則認為在此實驗條件下樣品無干擾。若靈敏度復核值在 0.5 ?到 2 ?之外，則認為在此實驗條件下樣品有干擾，需對樣品進行稀釋（稀釋倍數不得超過最大  有效稀釋倍數 MVD）或進行其它處理消除干擾。

14.凝膠限度實驗

凝膠限度實驗用于判斷樣品的內毒素含量是否超過藥典所規定的細菌內毒素限值。按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內毒素檢查法》的“凝膠限度實驗"進行實驗。在實驗有效的情況下，如果樣品管的兩個平行管均為陰性，判定樣品的內毒素含量小于藥典規定限值。如果樣品管的兩個平行管均為陽性，判定樣品的內毒素含量不符合藥典規定。如果樣品管的兩個平行管一管為陽性，另一管為陰性，需進行復試。復試時，樣品需做 4 個平行管，若所有平行管均為陰性，判定樣品符合規定，否則判定樣品不符合規定。

15.凝膠半定量實驗

本方法系通過確定反應終點濃度來量化樣品中內毒素含量。詳見《中華人民  共和國藥典》2010 版中《細菌內毒素檢查法》的“凝膠半定量實驗"。

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