產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒是用于質(zhì)粒 DNA 大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過(guò)離心吸附柱，專一結(jié)合 DNA，最后洗去雜質(zhì)，高效快速提取質(zhì)粒 DNA， 全套操作可以在 30 分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從 50-100 mL 過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá) 300-500 ug 的高純度質(zhì)粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及 PCR 等。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.快速、步驟少，整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。

2.純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間。

3.產(chǎn)量高，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到 2-5 ug/mL。

4.用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。

5.本產(chǎn)品足夠 5 次質(zhì)粒 DNA 大量純化。

6.質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒（過(guò)柱法）只可用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 A26 mL30 mL 本色瓶

質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B26 mL30 mL 本色瓶

質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 C36 mL60 mL 本色瓶

RNase A 溶液（10mg/mL）0.6 mL1.5 mL 本色管

DNA 離心吸附柱（大提）

5 套塑料袋

通用洗柱液100 mL120 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，其中 RNase A 溶液需要低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

50 mL 塑料離心管

使用方法：

1.用 250 mL 離心管收集 100-300 mL 菌液，5000 rpm 離心 10 分鐘，去除上清。

2.往細(xì)菌沉淀中加入 5 mL 質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 A，充分振蕩懸浮（第一次使用時(shí)需要將 RNase A 溶液全部加入到溶液 A 中并混合均勻，未用完的、含RNase A 的溶液 A 需放 4℃保存）。注意：充分重懸細(xì)胞沉淀使之無(wú)細(xì)胞結(jié)塊狀物對(duì)于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。

3.加入 5 mL 質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B，溫和翻轉(zhuǎn) 10 余次至藍(lán)色變得均勻。

室溫放置 5-10 分鐘裂解細(xì)菌。注意：避免劇烈振蕩，否則細(xì)菌基因組 DNA

將斷裂為小片段，與質(zhì)粒難以分離，污染質(zhì)粒 DNA。質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會(huì)進(jìn)入溶液，形成碳酸， 中和質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B 中的堿，降低其效率。如果質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B 顏色不是藍(lán)色，則表示變質(zhì)，應(yīng)該棄之不用并且速跟廠家聯(lián)系。

4.加入冰浴的 7 mL 質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 C，顛倒混勻，此時(shí)混合液應(yīng)該從藍(lán)色變成無(wú)色，如果不發(fā)生顏色變化，則表示質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 C 變質(zhì)，需要聯(lián)系廠家。將混合液冰上放置 10 分鐘，將有白色絮狀物形成。注意不要過(guò)分振蕩。

5.6000 rpm 離心 10 分鐘。如果離心管承受能力強(qiáng)，離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。

6.將上清液（約 20 mL）轉(zhuǎn)移到 DNA 離心吸附柱（大提）中，放入 50 mL 套管中。由于此時(shí)的溶液比重較大，部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常，吸取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀物即可。

7.6000 rpm 離心 5 分鐘，質(zhì)粒 DNA 將與 DNA 離心吸附柱（大提）中的膜結(jié)合，棄穿透液。

8.將 10 mL 通用洗柱液加入到 DNA 離心吸附柱（大提）中，室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘，棄穿透液。

9.重復(fù)上步一次，即將 10 mL 通用洗柱液加入到 DNA 離心吸附柱（大提）中， 室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘，棄穿透液。

10.室溫 6000 rpm 空甩 5 分鐘，棄穿透液。注意：此步對(duì)去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會(huì)影響 DNA 的使用。

11.將 DNA 離心吸附柱（大提）放入一個(gè)自備的、干凈的 50 mL 塑料離心管中， 加 0.5 mL DNA 洗脫液（洗脫液如加熱到 50-65℃效果更佳），室溫靜置 2 分鐘后 6000rpm 離心 5 分鐘，收集液即是質(zhì)粒 DNA 溶液。

12.本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強(qiáng)，所以再用 1 mL DNA 洗脫液洗脫3-4 次才能把絕大部分質(zhì)粒 DNA 洗脫下來(lái)。得到的 DNA 可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果 DNA 洗脫液不夠，可以用自備的 DEPC 水代替。注：一般情況下，第一次洗脫可以洗脫約 25%的質(zhì)粒 DNA；第二次洗脫可以洗脫約 35%的質(zhì)粒 DNA；第三次洗脫可以洗脫約 20%的質(zhì)粒DNA；第四次洗脫可以洗脫約 10%的質(zhì)粒 DNA；第五次洗脫可以洗脫約 8% 的質(zhì)粒 DNA。

13.合并所得質(zhì)粒 DNA，立即使用或-20℃儲(chǔ)存。如果需要使用液相內(nèi)毒素清除劑清除質(zhì)粒 DNA 中的內(nèi)毒素，可以直接將此步所得的 DNA 溶液用于去內(nèi)毒素處理。如果 DNA 濃度太低，可以另購(gòu)本公司的核酸濃縮劑進(jìn)行濃縮。

選擇我們的質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒（過(guò)柱法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！