產品簡介：

本試劑盒是基于 Inoue 方法的、高效快速 E.coli 化學感受態細胞制備試劑盒。

產品特點：

1.一步式操作，離心后重懸細胞即可，非常簡單。

2.轉化率高，轉化效率一般都在 10E8/ug 質粒以上。

3.重復性好，可用于各種 E.coli 菌種，包括 K12 系（如 JM109、DH5a 等）和

B 系（如 BL21 系列菌種）。

4.適用于低、中、高拷貝的各種質粒。

5.本試劑盒足夠 20 次制備，每次可以制備可以用 50 mL 菌液制備 80 管感受態細胞。所得感受態細胞在-80℃至少可以保存半年以上。

6.高效E.coli感受態細胞制備試劑盒只能用于科研。

產品參數：

名稱規格包裝

E.coli 化學感受態細胞制備

溶液A250 mL×2250mL 本色瓶

E.coli 化學感受態細胞制備

溶液 B6 mL10mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，4℃保存（開封后請-20℃保存，防止污染），有效期一年。

自備試劑

無菌超純水，SOB 和 SOC 液體培養基，相關抗菌素，溫控搖床。

使用方法：

1.劃盤，過夜培養出單菌落。

2.次日下午，接種一個單個直徑為 2-3 毫米的菌落到 1 mL 不含抗生素的 SOB

液體培養基中，37℃ 220rpm 搖晃過夜培養。

3.次日早上，將 20 uL 上步得到的菌液接種到 2 mL SOB 液體培養基中，37℃

250-300 rpm 搖晃培養 3 小時。此時菌液將輕微渾濁。

4. 將 1 mL 上步得到的菌液接種到 50 mL SOB 液體培養基中（用 250 mL 三角瓶），用戶也可以分別接種 1 mL，0.5 mL 和 0.25 mL 到 3 個 50 mL 的 SOB液體培養基中，這樣 2-3 小時測 OD 時總有一瓶 OD 會在 0.3-0.4，避免了多次測 OD 可能帶來的污染。

5.  室溫或 18℃ 250-300 rpm 搖晃培養 2-3 小時，直到 OD600 在 0.3-0.4 之間。注意：確保室溫或 18℃培養非常重要，在此溫度下細菌 OD600 達到0.3-0.4 所需時間跟菌種不同而不同。

6. 將菌液放置在冰上 10 分鐘。同時預冷下步要用的 50 mL 無菌離心管和 20 mL溶液A。所需冷凍離心機也最好開啟制冷。

7.將 50 mL 菌液轉移到 2 個預冷的無菌離心管中，每管 25mL。在冷凍離心機上 4oC 3000g 離心 10 分鐘，棄上清。注意：必須低溫離心，否則轉化效率將減低 100 倍。

8.再在 4oC 3000g 短暫離心半分鐘，用移液槍小心吸出殘留液體。注意：殘留上清必須徹-底去除，否則會影響感受態效率。

9.在沉淀中加入 20 mL 預冷的溶液 A，輕彈離心管底輕柔重懸菌體。注意：不要渦旋振蕩。

10.冰上放置 5 分鐘。期間預冷 4.3 mL 新鮮配制的感受態活化液（4 mL 溶液A+0.3 mL 溶液 B，充分混勻后放冰上）和裝感受態細胞所需的無菌塑料離心管。

11.4oC 3000g 離心 10 分鐘，棄上清。

12.在沉淀中加入 4 mL 第 9 步預冷的感受態活化液，重懸細菌后冰上放置 10 分鐘。

13.按 50 uL/管分裝到預冷的無菌塑料離心管中。此時細胞將處于感受態，可以直接用于轉化，也可立即放到-80℃保存。50 mL 菌液一次可以制備 80 管感受態細胞。

二：轉化步驟

1.將凍存的感受態細胞置于冰中解凍。

2.加入 1-5 uL 質粒（100pg-10ng）或 1-5 uL 連接反應液。用加 DNA 的移液器輕柔吹打混勻，不要渦旋震蕩。

3.冰浴 15-30 分鐘。期間可以 37oC 預熱 1 mL 自備的、不含抗菌素液體培養基

（此處最好用 SOB，因為 LB 培養基將降低轉化率）。

4.42oC 熱激 60 秒后冰浴 1-2 分鐘。

5.加入 1 mL 37oC 預熱的不含抗菌素液體培養基后，37oC 保溫 1 小時。如能

160~225rpm 振蕩培養更佳。

6.將 50-100 uL 菌液涂布在含適當抗菌素的瓊脂平板培養基上，37oC 過夜培養。

選擇我們的高效E.coli感受態細胞制備試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！