產品簡介：

DNA 只存在于細胞核內，因此參與轉錄調節(jié)和 DNA 復制的蛋白質主要存在于細胞核中。要研究蛋白質與 DNA 的相互作用，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細胞核蛋白質。目前、細胞核蛋白質制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量樣品時尤其不便，為此本公司基于溶脹法原理開發(fā)了本產品，用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞核蛋白的溫和微量提取。

產品特點：

1.提取制備過程簡便，只需要一小時。

2.實驗重復性好，尤其適合同時處理多個樣品。

3.可用于培養(yǎng)的動物細胞，也可以用于新鮮組織細胞。

4.提取步驟溫和，制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉錄因子活性分析、凝膠阻滯實驗(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、 DNA 足跡圖實驗、甲基化干擾實驗和酶活性測定等研究。

5.1E6 個細胞中可以得到 50-70 μg 的核蛋白質。

6.只適用于哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞，不適用于植物和真菌等生物。

7.本產品足夠 50 次細胞核微量純化實驗。

8.細胞核-細胞漿蛋白提取試劑盒（溶脹法）只能用于科研。

產品參數(shù)：

名稱規(guī)格包裝

動物細胞溶脹液50 mL60 mL 本色瓶

動物細胞核溶脹液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

PMSF、DTT、PBS、胰-酶溶液等

使用方法：

實驗前準備：取適當量（根據樣品數(shù)量確定）的動物細胞溶脹液和動物細胞核溶脹液到新的塑料瓶中，置于冰上預冷，并在使用前數(shù)分鐘內同時向動物細胞溶脹液和動物細胞核溶脹液中加入自備的 PMSF 和 DTT，使 PMSF 的最終濃度為

0.2 mM，DTT 的最終濃度為 1 mM。實驗中所用試劑均需先預冷。一、提取培養(yǎng)細胞和懸浮細胞細胞核：

1.  培養(yǎng)細胞：將覆蓋率為 55-65%的培養(yǎng)細胞用自備的胰-酶溶液按標準的胰-酶法處理，然后刮到 1.5 mL 塑料離心管中，4℃ 600 g 離心 3 分鐘，小心

棄上清。細胞數(shù)量最好在 5E5-7 個。細胞沉淀體積約 0.1 mL。

2.懸浮細胞：直接將 5E5-7 個懸浮細胞轉移到 1.5 mL 塑料離心管中，4℃

600 g 離心 3 分鐘，小心棄上清。細胞沉淀體積約 0.1 mL。

3.用 1 mL 自備的預冷的 PBS 緩沖液重懸細胞沉淀，然后 4℃ 600 g 離心 3 分鐘，小心棄上清。注意：必須盡快用 PBS 緩沖液洗滌細胞沉淀，否則沉淀細胞產生的 CO2 將使局部 pH 減低產生毒性。

4.在細胞沉淀中加入 1 mL 預加了 PMSF 和 DTT 的動物細胞溶脹液，用手指輕柔彈管壁使細胞沉淀懸浮起來。最好不要用槍頭。

5.冰浴 10 分鐘。如果有條件可以取少量樣品涂片，在顯微鏡下觀察，90%的細胞將呈現(xiàn)氣球狀。如果沒有則繼續(xù)冰浴直到\90%的細胞呈現(xiàn)氣球狀。

6.渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。如果有 Dounce 玻璃勻漿器，也可以用預冷的勻漿器勻漿 10-12 次。如果有條件可以取少量樣品涂片，在顯微鏡下觀察，90%的細胞將破裂。如果未破裂細胞折光度高，并且沒有膨脹，則表示這些細胞已經死亡。如果這樣的細胞太多，則需要重新取樣。

7.4℃ 1000 g 離心 3 分鐘，小心棄上清。沉淀為細胞核，上清為胞漿成分， 如果需要可以留存上清。

8.在細胞核沉淀中加入 100 μL 預加了 PMSF 和 DTT 的、預冷的動物細胞核溶脹液，輕彈離心管混勻，使沉淀懸浮起來。

9.冰浴 20 分鐘。

10.4℃  1000 g 離心 2 分鐘，小心收集上清液（細胞核提取物），可立即用于后續(xù)的凝膠滯后實驗、BCA 法蛋白濃度測定、活性檢測、SDS-PAGE 電泳、2D 電泳等實驗，也可以分裝后放-70℃長期保存。

說明：本方法可以從 1E6 個細胞中得到 50-70 μg 的核蛋白質。二、對新鮮組織：

11.將 100-150 mg 新鮮組織置于培養(yǎng)皿中，用手術-剪將組織盡可能切成非常細小的碎片，盡量去除脂肪組織和結締組織等非目的組織，用自備的 PBS 緩沖液洗滌 2 次，離心后去上清。在組織沉淀中加入 400 μL 預加了 PMSF 和 DTT 的動物細胞溶脹液，在預冷的玻璃勻漿器內充分勻漿。勻漿需在冰浴或 4oC 進行。

12.勻漿后把勻漿液轉移到塑料離心管內，用手指彈管壁使沉淀懸浮起來，冰浴放置 10-20 分鐘，渦旋激烈震蕩 10 秒混勻。

13.接下來按照步驟 7-10 操作，即得到新鮮組織細胞核蛋白提取物。

選擇我們的細胞核-細胞漿蛋白提取試劑盒（溶脹法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！