產品簡介：

石蠟包埋切片 DNA 樣本、血液游離 DNA 樣本、法醫 DNA 樣本和考古 DNA 樣本都是非常重要的實驗材料，但是這些材料的 DNA 不但含量稀少，而且往往都高度降解，使用前都需要先進行擴增。目前進行擴增的方法很多，包括 PEP-PCR、DOP-PCR、MDA、SCOMP，balanced-PCR 等，但各有缺點，不盡人意。為此，本公司結合 DNA 環化技術和 RCA 滾環擴增技術，對痕量 DNA 進行擴增。其原理示意圖如下：

產品特點：

1.即開即用，十分簡單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.直接使用純化的線狀 dsDNA 為模板。本產品不包括純化試劑盒。如果 DNA 是古舊的有損傷的 DNA，需要使用另外的試劑盒（痕量古舊 DNA 修復及擴增試劑盒）。

3.最-低可以使用 5pg 的模板 DNA（一個人體細胞的 DNA 為 6pg），最后可以擴增上 1 千-1 萬倍（起始模板DNA 越少，擴增倍數越高）。

4.優化的反應體系，所有反應一管式完成，避免了珍貴痕量樣本的丟失。

5.使用高保真的phi29 DNA 聚合酶進行擴增，避免了在擴增過程中引入新突變。

6.擴增試劑含熒光染料，可以實時監測擴增反應過程，不需要跑電泳檢測，節約寶貴的擴增后樣品。

7.本產品足夠 50 次 20uL 體系的環化-擴增反應。

8.得到的 DNA 可以直接用于二代測序、酶切或qPCR 等后續實驗。

9.痕量 DNA 滾環擴增試劑盒只能用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

10×DNA 環化-擴增緩沖液100 uL0.5mL 白蓋管

DNA 環化酶 A25 uL0.5mL 紅蓋管

DNA 環化酶B25 uL0.5mL 紅蓋管

RCA 專用隨機引物溶解液10 uL0.5mL 綠蓋管

RCA 專用隨機引物干粉50 次0.5mL 本色管

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL50 uL0.5mL 紅蓋管

超純水1mL1mL1.5mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

樣本 DNA 純化試劑盒、DNA 片段回收試劑盒（從 RCA 反應體系中回收擴增產物）

使用方法：

一、DNA 環化

1.首-次使用本試劑盒時，需要在 RCA 專用隨機引物溶解液化凍后，將 110uL 全部加入到 RCA 專用隨機引物干粉管中，渦旋震蕩半分鐘溶解，短暫離心，得 RCA 專用隨機引物。放冰上待用。沒用完的需要放-20℃長期保存。

2.按下表在 200uL 的PCR 管中設置和進行 DNA 環化-擴增反應：

成分管 1（樣本）管 2

（無模板對照）

自備模板 DNA（5pg-100ng）1-8.5 uL不加

10×DNA 環化-擴增緩沖液1 uL1 uL

超純水加到 9.5 uL加到 9.5 uL

DNA 環化酶 A0.5 uL0.5 uL

合計10 uL10 uL

在 PCR 儀器上 37℃ 2 小時，65℃ 20 分鐘滅活酶

超純水4.0 uL4.0 uL

10×DNA 環化-擴增緩沖液0.5 uL0.5 uL

DNA 環化酶 B0.5 uL0.5 uL

合計15 uL15 uL

室溫放置 2 小時，65℃ 10 分鐘滅活酶

超純水1.5 uL1.5 uL

10×DNA 環化-擴增緩沖液0.5 uL0.5 uL

RCA 專用隨機引物溶液2 uL2 uL

合計19 uL19 uL

放在PCR 儀器上，設置 95℃加熱 5 小時，自然冷卻到室溫。

再加入下列成分

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL1 uL1 uL

混勻后放熒光定量PCR 儀器上，設置 30℃保溫 16 小時，每 10 分鐘

設置成一個循環，每個循環采集一次 SYBR 通道的熒光信號。

二、數據分析

3.由于是可以實時檢測RCA 擴增反應，所以RCA 擴增反應不一定進行 16 小時， 可以在擴增熒光信號的曲線進入平臺期（已經沒有新的 DNA 合成）后結束。因為 phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性，在擴增反應耗盡 dNTP 后，它可能會進入酶切模式，逐漸降解已經合成的 DNA。

4.65℃保溫 10 分鐘滅活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性， 因此必須滅活，否則它將逐漸降解反應管中已經合成的 DNA。

5.典型實驗結果。有擴增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無模板對照將沒有此擴增曲線（見下圖）：

6.如果沒有熒光定量 PCR 儀器，則只能電泳檢測或PCR 檢測是否有擴增。

7.擴增所得 DNA 可以用于后續實驗，如 qPCR 擴增。如果后續實驗需要純化去除dNTP（如通過測 OD 確定濃度）或去除 RCA 專用隨機引物，則需要自備試劑盒進行純化處理。

選擇我們的痕量 DNA 滾環擴增試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！