產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是基于DNA環(huán)化技術(shù)和MDA技術(shù)、用于從單細(xì)胞（或數(shù)個(gè)細(xì)胞）中制備和擴(kuò)增全基因組的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備和優(yōu)化所需試劑。

2.可以擴(kuò)增單個(gè)細(xì)胞的基因組達(dá)上萬(wàn)倍。

3.具有全基因組擴(kuò)增的所有特點(diǎn)，包括高產(chǎn)量和高保真性。

4.可使用各種來(lái)源的樣品，包括培養(yǎng)細(xì)胞和胚胎細(xì)胞等。

5.產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn)，包括多重PCR、長(zhǎng)片端PCR、定量PCR、克隆、文庫(kù)構(gòu)建、單倍型分析、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析（片段差異，微衛(wèi)星差異、SNP、STR）等。

6.單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒(MDA熒光染料法)足夠30 次微量擴(kuò)增。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

單細(xì)胞裂解液(擴(kuò)增專(zhuān)用)100 μL0.5 mL 本色蓋

單細(xì)胞 MDA 擴(kuò)增溶液 A30 μL0.5 mL 藍(lán)色蓋

MDA 專(zhuān)用隨機(jī)引物溶液60 μL0.5 mL 白色蓋

20×飽和染料30 μL0.5 mL 棕色管

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液50 μL0.5 mL 綠色蓋

dNTP（25mM）30 μL0.5 mL 黃色蓋

DNA 環(huán)化酶A15 μL0.5 mL 紫色蓋

DNA 環(huán)化酶B15 μL0.5 mL 橙色蓋

Phi 29 DNA 聚合酶（10U/μL）15 μL0.5 mL 紅色蓋

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

超純水,重懸細(xì)胞緩沖液

使用方法：

1如果有 N 個(gè)樣本，則標(biāo)記 N+1 個(gè) 0.2 mL 的PCR 管，在每個(gè)管中加入 2.5 μL 單細(xì)胞裂解液（擴(kuò)增專(zhuān)用）。多出的一個(gè)管標(biāo)為無(wú)模板對(duì)照管。

2將細(xì)胞懸浮在自備的 PBS 緩沖液或其他合適的緩沖液中，在顯微鏡下用毛細(xì)管轉(zhuǎn)移單個(gè)細(xì)胞（或數(shù)個(gè)細(xì)胞，總體積不超過(guò) 2.5 μL）到上步準(zhǔn)備的管中。在無(wú)模板對(duì)照管中不加入細(xì)胞，只加入 2.5 μL 重懸細(xì)胞所用的緩沖液。

3室溫放置 10 分鐘裂解細(xì)胞，所得裂解液為單細(xì)胞裂解液。

1.   在上步的 5 μL 單細(xì)胞裂解液中按下表加入各成分：

成分N 個(gè)樣本管無(wú)模板對(duì)照管

超純水4.5 μL4.5 μL

DNA 環(huán)化酶A0.5 μL0.5 μL

在 PCR 儀器上 37℃ 2 小時(shí)，65℃ 20 分鐘，95℃ 5 分鐘，

待溫度下降到 30°C 左右加入

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液0.5 μL0.5 μL

單細(xì)胞 MDA 溶液 A1 μL1 μL

DNA 環(huán)化酶B0.5 μL0.5 μL

超純水3 μL3 μL

在 PCR 儀器上 65℃ 1 小時(shí)，85℃ 10 分鐘后加入

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液0.5 μL0.5 μL

MDA 專(zhuān)用隨機(jī)引物溶液2 μL2 μL

20×飽和染料1 μL1 μL

dNTP（25mM）1 μL1 μL

在 PCR 儀器上 95℃ 5 分鐘，自然冷卻到室溫后加入

phi29 DNA 聚合酶，10U/μL0.5 μL0.5 μL

合計(jì)20 μL20 μL

430℃保溫 12 小時(shí)。最好使用 PCR 儀進(jìn)行 30℃保溫（注意：不是 37℃）并打開(kāi)熱蓋保溫。每 10 分鐘設(shè)置成一個(gè)循環(huán)，采集一次 SYBR 通道的熒光信號(hào)。由于是可以實(shí)時(shí)檢測(cè)反應(yīng)，所以反應(yīng)不一定要在設(shè)置時(shí)間到達(dá)后結(jié)束，可以在擴(kuò)增曲線進(jìn)入平臺(tái)期后（已經(jīng)沒(méi)有新的 DNA 合成）結(jié)束。

565℃保溫 10 分鐘使phi29 DNA 聚合酶滅活。注：由于 phi29 DNA 聚合酶有DNA

外切活性，所以最好將其滅活以免干擾后續(xù)反應(yīng)。

6典型實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有擴(kuò)增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無(wú)模板對(duì)照將沒(méi)有此標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線（見(jiàn)下圖）或擴(kuò)增曲線：

若采用 30℃金屬浴或水浴，必須在樣品管中加入 50μL 石蠟油以防水分蒸發(fā)，使用電泳檢測(cè)或PCR 檢測(cè)是否有擴(kuò)增。

7擴(kuò)增所得 DNA 可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

選擇我們的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒(MDA熒光染料法)，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！