產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是專門針對(duì)藻類 RNA 提取開發(fā)的高效 RNA 提取試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作更加簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。

2.RNA 純度更高，OD260/OD280 比值一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)藻類中的多糖污染。

3.適用于常見的各種海水和淡水藻類的 RNA 提取。

4.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。

5.性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式藻類 RNA 提取產(chǎn)品。

產(chǎn)品參數(shù)：

成 份規(guī)格包裝材料

藻類 RNA 提取溶液 A50 mL60 mL 本色瓶

藻類 RNA 提取溶液 B15 mL15 mL 棕色玻璃瓶

藻類 RNA 提取溶液 C50 mL60 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

藻類RNA-提取試劑盒（過(guò)柱法）常溫運(yùn)輸和保存，溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。

自備試劑

氯仿。

使用方法：

1.估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 藻類（濕重）。注意海水藻類需要用純凈水洗滌 2 次以免藻類沉淀中殘留的海水鹽分干擾藻類 RNA 提取溶液 A 的作用。

2.液氮研磨破碎樣品：取 100-200 mg 離心得到的新鮮藻類細(xì)胞沉淀放入含液氮的研缽中，迅速將其研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到標(biāo)記的塑料離心管中，加入 1 mL 藻類 RNA 提取溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。

注意：藻類 RNA 提取溶液 A 在 4℃放置后容易產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃

水浴使沉淀徹-底溶解并充分搖勻后再取用。

3.將液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。

4.在離心管中加入 0.3 mL 的藻類 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自備氯仿，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀（顏色將根據(jù)提取的藻類不同而不同）。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來(lái)。

5.室溫 12,000-15,000×g 離心 3-5 分鐘，兩相間將有細(xì)胞破碎物。

6.將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有 DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。最好留下 100 μL 上清液不取。

7.加入等體積的藻類 RNA 提取溶液 C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對(duì)某些含糖量高的藻類，屬于正常現(xiàn)象），千萬(wàn)不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

8.先將一半的溶液（如果有沉淀，則將一半的懸濁液）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中， 13,000-15,000×g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

9.將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13,000-15,000×g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

10.加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液， 室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第 7 步加入藻類 RNA 提取溶液 C 后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量改為 0.4、0.3 和 0.3 mL。

11.室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的使用。

12.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 μL RNA 洗脫液，室溫放置 1-2 分鐘。

13.13,000-15,000×g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14.RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子。如果電泳發(fā)現(xiàn)DNA 污染嚴(yán)重建議減少起始樣本的用量，已經(jīng)純化好的 RNA 可另購(gòu)RNase-free DNase 去除 DNA 污染。

15.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH 7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在 OD260 的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。

16.RNA 純度測(cè)定：無(wú)污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有

蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。

選擇我們的藻類RNA-提取試劑盒（過(guò)柱法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！