產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品主要用于快速提取新鮮或冷凍的動(dòng)物組織中的基因組 DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.DNA 更加純凈，大多數(shù) DNA 樣品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之間。

2.DNA 產(chǎn)率一般在 200 ?g/g 左右(跟組織種類密切相關(guān))。

3.可直接用于 PCR、酶切、雜交等后續(xù)反應(yīng)。

4.操作更加簡(jiǎn)單，離心吸附操作代替離心沉淀，整個(gè)過(guò)程室溫操作約 10 分鐘， 適合大規(guī)模樣品處理。

5.安全無(wú)毒，本試劑盒對(duì)人體無(wú)毒，無(wú)腐蝕性和刺激性氣味。

6.性價(jià)比高，質(zhì)量和國(guó)外同類產(chǎn)品相當(dāng)，但價(jià)格更便宜。

7.動(dòng)物DNA純化試劑盒（過(guò)柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

動(dòng)物 DNA 純化溶液 A40 mL60 mL 本色瓶

動(dòng)物 DNA 純化溶液 B20 mL30 mL 本色瓶

動(dòng)物 DNA 純化溶液 C50 mL60 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脫液

（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存、有效期一年。

自備試劑

氯仿（也可省略，但產(chǎn)量會(huì)降低）

使用方法：

注意：動(dòng)物 DNA 純化溶液 A 容易產(chǎn)生沉淀，動(dòng)物 DNA 純化溶液 B 十分粘稠，用前均需要在 65℃水浴中加熱使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分搖勻。

1. 根據(jù)使用材料的不同進(jìn)行下列操作：

a) 對(duì)貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，在每 10 平方厘米細(xì)胞中加入 0.8 mL 預(yù)熱的動(dòng)物DNA 純化溶液 A，用槍充分吹打以確保細(xì)胞全部裂解，然后把裂解液轉(zhuǎn)移到1.5 mL 塑料離心管中。

b)  對(duì)懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，在每 1-5×106 懸浮細(xì)胞中加入 0.8 mL預(yù)熱的動(dòng)物 DNA 純化溶液 A，用槍充分吹打以確保細(xì)胞全部裂解。然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 細(xì)胞，

0.8 mL 動(dòng)物 DNA 純化溶液 A 的細(xì)胞使用量不要超過(guò) 1×106 個(gè)細(xì)胞。

c)對(duì)新鮮或冷凍的組織：先將剪切成小塊的新鮮組織或冷凍保存的組織放入 10 mL 或 15 mL 塑料離心管中，每 50-100 mg 組織加 0.8 mL 預(yù)熱的動(dòng)物 DNA 純化溶液 A，用剪切式勻漿器勻漿 30 秒左右，然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。對(duì)肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織（細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的 DNA），建議組織的使用量不要超過(guò) 50 mg。

d)對(duì)非凍型 DNA 保存液保存的組織：先用紙吸去保存液后再剪切成小塊，其余操作同新鮮或冷凍組織的處理。

2.加入 0.4 mL 預(yù)熱的動(dòng)物 DNA 純化溶液 B 到裂解液中。由于動(dòng)物 DNA 純化溶液 B 十分粘稠，可將 1mL 槍頭剪掉一截再用，也可以用稱量方法加 0.4 g。加入動(dòng)物 DNA 純化溶液 B 后需要顛倒數(shù)次充分混勻。

3.65℃水浴 5-10 分鐘。如果室溫放置，DNA 產(chǎn)量將降低 10-20%。

4.加入 0.2 mL 自備氯仿，振蕩器上充分振蕩混均 30 秒，此時(shí)溶液將呈乳白色。一定要確保離心管底的液體被震蕩起來(lái)。

5.12000-15000×g 室溫離心 2 分鐘。上清透明，中間層為白膜（蛋白層）。

6.小心將上清液平均轉(zhuǎn)移到兩個(gè)新的離心管中，避免觸及中間的白膜。

7.每個(gè)管中加入 1.5 倍體積的動(dòng)物 DNA 純化溶液 C，充分顛倒混勻。

8.分兩次上柱（即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘， 12000-15000×g 室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000-15000×g 室溫離心半分鐘，棄穿透液）。

9.加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000×g 室溫離心半分鐘， 棄穿透液。

10.加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000×g 室溫離心半分鐘， 棄穿透液。

11.12000-15000×g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)污染 DNA。

12.室溫放置半分鐘使殘留乙醇揮發(fā)。

13.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50-100 ?L DNA 洗脫液（基因組 DNA 專用），室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。

14.12000-15000×g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 DNA 樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

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