產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品可以用于絕大多數(shù)革氏陽性和陰性細(xì)菌基因組 DNA 的快速提取。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過程不到 20 分鐘。

2.產(chǎn)率一般在 5-20 μg/mL 過液培養(yǎng)的飽和菌液（108-109 個(gè)細(xì)胞）。

3.OD260/280 一般在 1.8 以上，可直接用于 PCR、酶切、雜交等實(shí)驗(yàn)。

4.DNA 片段長(zhǎng)度一般在 40-50 kb 左右。

5.每次提取可以處理 0.1-1.5 mL 的細(xì)菌，也可以使用菌落。

6.價(jià)廉物美，與國(guó)外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價(jià)格便宜。

7.安全無毒，本試劑盒對(duì)人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。

8.細(xì)菌DNA純化試劑盒（過柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成 份 規(guī)格包裝材料

溶菌-酶干粉 600 mg1.5 mL 白色管

細(xì)菌 DNA 純化溶液A15 mL15 mL 本色瓶

細(xì)菌 DNA 純化溶液 B 7.5 mL10 mL 本色瓶

細(xì)菌 DNA 純化溶液 C 30 mL30 mL 本色瓶

離心吸附柱 50 套塑料袋

通用洗柱液 50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用） 10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè) 1 份1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸及保存（溶菌-酶干粉可以常溫運(yùn)輸，但長(zhǎng)期保存需要放 4℃或-20℃），有效期一年。

自備試劑

氯仿、自備無菌水。

使用方法：

注意：細(xì)菌 DNA 純化溶液 A 和細(xì)菌 DNA 純化溶液 B 容易產(chǎn)生沉淀，細(xì)菌 DNA 純化溶液B 十分粘稠，均需要放置在 65℃預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。一: 對(duì)革氏陰性細(xì)菌樣品，不需用溶菌-酶

1.將 0.1-1.5 mL 過夜培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中，12,000 ×g 室溫離心1 分鐘沉淀細(xì)菌，棄上清。

2.加入 300 μL 預(yù)熱的溶細(xì)菌 DNA 純化液A 到細(xì)菌沉淀中，充分吹打均勻。

3.再加入 150 μL 預(yù)熱的細(xì)菌 DNA 純化溶液 B 到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時(shí)溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。由于溶液 B 比較粘稠，可以采取稱量方法取用，150 μL 約等于 150-160 mg。也可以將 1 mL 槍頭剪去一截再吸取。

4.65℃放置 3-5 分鐘。如果室溫放置，DNA 產(chǎn)量會(huì)降低 10-20%。

5.加入 200 μL 自備氯仿，震蕩混勻 10-30 秒，此時(shí)溶液將呈乳白色。

6.12,000 ×g 室溫離心 2 分鐘。此時(shí)上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。

7.加入 1.5 倍體積(約 0. 7 mL)的細(xì)菌 DNA 純化溶液 C，顛倒混勻后全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置至少 2 分鐘。

8.12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘，DNA 將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。

9.將 0.5 mL 通用洗柱液加入離心柱中，12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘，棄穿透液。

10.重復(fù)上步操作一次。

11.空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的 1.5 mL 離心管中。

12.加 50-100 μL DNA 洗脫液（基因組純化專用），室溫放置 3-5 分鐘。

13.12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘即得 DNA 溶液。

14.由于本產(chǎn)品使用的離心吸附柱吸附 DNA 的能力較強(qiáng)，可以重復(fù)上步操作一次以便得到更多的 DNA。

15.直接取 5-10 μL 電泳檢測(cè)DNA，其余放冰箱備用。二: 對(duì)革氏陽性細(xì)菌樣品，需用溶菌-酶

1.將 0.1-1.5 mL 過夜培養(yǎng)的革氏陽性細(xì)菌 12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘后, 重懸于 0.6

mL 溶菌液中（溶菌液配制:30 mL 無菌水+600 mg 溶菌-酶，配制后最好分裝成小管并放-20℃長(zhǎng)期保存，每次只用一小管)，顛倒混勻 5-10 次后放 37℃保溫至少 30 分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長(zhǎng)時(shí)間，需要自己根據(jù)不同的細(xì)菌摸索)。

2.12,000 ×g 室溫離心 10 分鐘，小心棄上清。

3.后續(xù)處理接上面的革氏陰性細(xì)菌提取步驟中的第 2 步。

三: 其他注意事項(xiàng)

1.可以直接使用細(xì)菌菌落提取 DNA，操作時(shí)直接將細(xì)菌菌落挑入到細(xì)菌 DNA 純化溶液A 中，后續(xù)操作同上。

2.從單個(gè)菌落中提取到的 DNA 較少，所以只用 30 μL DNA 洗脫液（基因組純化專用）洗脫。

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