產品簡介：

易錯 RCA（Error-Prone Rolling Circle Amplification）是利用 phi29 DNA多聚酶在一定條件下（如不同的 dNTP 濃度、不同的 Mg 濃度和 MnCl2 存在時）能夠按較高的機率引入隨機引入突變。易錯 RCA 彌補了易錯 PCR 的巨大缺陷，其中一個缺陷是易錯PCR 沒法使用短的 DNA 片段，因為PCR 引物就占了 40 個 bp 左右， 故不適合小片段 DNA 突變。但任何短鏈 DNA 經過環化后，均可進行易錯 RCA，故易錯 RCA 可以對短的DNA 片段進行突變。單鏈 DNA 模板易錯 RCA 示意圖如下：

產品特點：

1.即開即用，十分簡單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.配方經過精心優化，突變率穩定，一般能產生 3-5 個突變/kb。如果需要更高的突變率，只需把上一次易錯 RCA 的產物用作下一次易錯 RCA 的模板即可。也可以選購本公司的 Bst 法易錯 RCA 試劑盒。

3.靶分子 DNA 既可以是長度只有幾十 bp 的小片段 DNA，如啟動子，適配子，酶活性區，核糖體結合區等，也可以是質粒，BAC，YAC 或全基因組。只是短的DNA 需要預先環化。

4.本試劑盒不含突變短的 DNA 所需要的環化試劑。

5.試劑含有熒光染料，可以實時檢測反應情況，隨時終止。也避免電泳，節約珍貴的擴增產物。

6.RCA 屬于恒溫擴增，只需要水浴或金屬浴，不需要貴重的 PCR 儀器。

7.本產品足夠 50 次 20uL 體系的易錯 RCA 反應。

8.易錯滾環擴增試劑盒（phi29 法）只能用于科研。

產品參數：

產品規格

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

環狀 DNA 模板、超純水。

使用方法：

1.首-次使用本試劑盒時，需要在裝易錯 RCA 引物干粉的黃蓋管中加入 55uL 的自備超純水，吹打混勻后短暫離心，放冰上待用。沒有用完的引物需要放-20℃保存。

2.設置 20uL 體系的易錯 RCA 反應。以下以一個樣為例，每個樣本最好設置兩個濃度，每次實驗設置一個無模板陰性對照：

成分濃 度 1 濃 度 2 陰 性 對 照

4×易錯PCR 預混液5 uL5 uL5 uL

易錯 RCA 引物1 uL1 uL1 uL 易錯 RCA 專用 MnCl21 uL1 uL1 uL 環狀 DNA 模板1ng50ng不加

補自備超純水到19 uL19 uL19 uL

3.95℃2 分鐘后，放室溫自然冷卻。

4.每管中加入 0.5uL 易錯 RCA 專用 DNA 聚合酶。

5.30℃保溫 24 小時，每 10 分鐘設置為一個循環，在 SYBR 通道采集熒光信號。

6.實時檢查易錯 RCA 熒光信號，在兩種情況下可以立即終止實驗，不一定要等 24 小時結束。一是兩個濃度模板中任何一個的熒光信號進入 S 型平臺期，二是無模板陰性對照的熒光信號正好要爬升而樣品的熒光信號已經爬升，此時可終止實驗，將樣本的擴增產物進行后續處理。

7.擴增結束后，對有擴增信號的樣品，按常規操作進行 DNA 回收，再限制性內切

酶酶切驗證。如果得到預期大小的片段，則膠回收 DNA，再進行克隆和測序等后續操作。

8.易錯 RCA 的擴增產品可以用水稀釋 10 倍后，再進行全基因組擴增，得到更多的DNA，然后再進行酶切，膠回收，克隆等后續操作。

選擇我們的易錯滾環擴增試劑盒（phi29 法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！