產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

分離純化環(huán)狀 DNA（質(zhì)粒 DNA、線粒體 DNA、葉綠體 DNA 和某些病毒DNA）的時(shí)候經(jīng)常需要去除其中的線狀 DNA 污染，而保留共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA 和帶 nick 切口和 gap 缺口的環(huán)狀 DNA。本公產(chǎn)品就是為滿足此需求而開發(fā)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，不需用戶花費(fèi)大量時(shí)間去摸索各種條件。

2.酶法去除線性 DNA，專一性強(qiáng)，可以使線狀 DNA 污染降級(jí)幾個(gè)數(shù)量級(jí)，不會(huì)干擾后續(xù)試驗(yàn)。

3.不降解有 nick 和 gap 的環(huán)狀 DNA，包括質(zhì)粒 DNA、線粒體 DNA、葉綠體 DNA、環(huán)狀病毒 DNA。

4.處理不依賴于 DNA 序列，可降解任何線狀 DNA。而內(nèi)切酶去除線狀 DNA 則需要預(yù)先確知其在環(huán)狀 DNA 上沒(méi)有酶切位點(diǎn)。

5.得到的環(huán)狀 DNA 可用于多種后續(xù)試驗(yàn)，尤其是 WGA、PCR 和測(cè)序等對(duì)污染敏感的試驗(yàn)。

6.本產(chǎn)品足夠 30 ?L 體系使用 50 次。

7.線狀DNA清除劑（酶法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

超純水，75%乙醇

使用方法：

1.在干凈塑料離心管中，按下表加入各成分（30 UL 體系）：

成份樣品陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照

DNA（1-2 ?g）自備樣品 DNA自備環(huán)狀 DNA自備線狀 DNA

線狀DNA 清除劑溶液A3 ?L3 ?L3 ?L

線狀DNA 清除劑溶液B1 ?L1 ?L1 ?L

自備超純水補(bǔ)到 30 ?L補(bǔ)到 30 ?L補(bǔ)到 30 ?L

2.在 PCR 儀器上 37℃保溫 16 小時(shí)。如果使用水浴或者金屬浴，則需要在管中加入 200 ?L 自備石蠟油以防止水分蒸發(fā)。注意：保溫時(shí)間過(guò)短可能會(huì)形成短的 DNA 片段，影響后續(xù)反應(yīng)，所以最好保溫 16 小時(shí)。。

3.65℃加熱 10 分鐘滅活相關(guān)酶。

4.反應(yīng)液可以直接用于后續(xù)的測(cè)序和 PCR 檢測(cè)。如果需要純化，則將 30 UL 酶反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 離心管中，再加入 60 UL 微量核酸沉淀劑。如果沒(méi)有使用石蠟油，則直接在 30 UL 酶反應(yīng)溶液中加入 60 UL 微量核酸沉淀劑。注意：微量核酸沉淀劑有沉淀，取用前需要充分搖勻。

5.室溫 15000 g 離心 10 分鐘。

6.棄上清后加自備的 75%乙醇 1 mL，振蕩混勻。

7.15000 g 離心 3 分鐘，棄上清。

8.再短暫離心后小心吸棄上清，沉淀即為回收的去除掉線狀 DNA 之后的 DNA 沉淀（含共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA 和帶 nick 和 gap 的環(huán)狀 DNA），可溶于自備超純水中后直接使用或放-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。

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