白介素Elisa检测试剂盒常见问题的成因与对策分享
更新时间：2025-11-04 | 点击率：303
白介素作为免疫系统的关键，其浓度变化直接反映机体炎症、感染或免疫状态。白介素Elisa检测试剂盒凭借高特异性与灵敏度，成为科研与临床检测白介素的黄金标准。然而，操作中稍有疏忽，便可能导致标准曲线异常、背景偏高或重复性差等问题。掌握
白介素Elisa检测试剂盒常见问题的成因与对策，是确保信号被精准读取的核心。
问题一：标准曲线线性差或R2值低（<0.99）
原因：标准品溶解不充分、稀释误差、孵育时间/温度不均或试剂失效。
对策：标准品需用推荐稀释液复溶，并短暂离心收集液体。采用多通道移液器进行梯度稀释，避免手动误差。确保所有孔在相同温湿度下孵育，使用恒温孵育箱而非室温放置。检查试剂是否在有效期内，避免反复冻融。
问题二：背景值过高（空白孔OD值>0.1）
原因：洗板不到位、封闭不充分、酶标二抗浓度过高或底物污染。
对策：洗板至少5次，每次拍干，避免残留酶或抗体。确保封闭液（如5%BSA）覆盖所有孔位，孵育时间充足（通常1小时）。若使用浓缩二抗，需严格按说明书稀释。底物液现配现用，避免暴露于强光或金属离子污染。
问题三：样品重复孔差异大（CV>15%）
原因：加样不准、样品混匀不均或孔间交叉污染。
对策：使用校准过的移液器，配合低吸附枪头，垂直缓慢加样。样品检测前充分涡旋混匀，必要时离心去除沉淀。避免枪头触碰孔壁，更换枪头以防交叉污染。
问题四：样品信号超出标准曲线范围
原因：样品浓度过高未稀释，或稀释倍数不当。
对策：预实验确定大致浓度范围，对高浓度样品进行梯度稀释（如1:10、1:50），确保OD值落在标准曲线中段（0.2–1.5）。稀释液应与标准品一致（如含1%BSA的PBS），减少基质效应。
问题五：整板信号普遍偏低
原因：酶标抗体失活、底物失效或终止液加入过早。
对策：检查酶标抗体是否避光保存、未反复冻融。底物应在避光条件下显色，按说明书时间终止反应（通常15–30分钟）。终止液需快速、均匀加入，避免部分孔提前终止。
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